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2022

胃蛋白酶試劑盒的應(yīng)用

作者：

　　胃蛋白酶試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人胃蛋白酶的含量。

　　實(shí)驗(yàn)原理

　　試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被胃蛋白酶捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的胃蛋白酶呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

　　樣本處理及要求

　　1.血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，然后1000×g離心20分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　2.血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　操作步驟：

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

　　3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

　　4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

　　結(jié)論:唾液胃蛋白酶檢測(cè)對(duì)胃食管反流病的診斷具有重要意義,并且具有無創(chuàng)、高效、簡(jiǎn)便、易于接受等優(yōu)勢(shì),有望成為胃食管反流病的重要診斷工具。清晨剛醒時(shí)作為唾液胃蛋白酶檢測(cè)采樣時(shí)間較三餐后1小時(shí)更為合適。

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蛋白酶的分類與功效

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